產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

酵母菌落PCR試劑盒(堿裂解法)是一種非常便捷的用于釀酒酵母、畢赤酵母等菌株在質(zhì)粒轉化后陽(yáng)性克隆菌落的PCR篩選和鑒定的試劑盒。本試劑盒提供了Yeast Lysis Buffer用于破壞酵母細胞壁，并提供了Yeast Colony PCR Mix (Red, 2×)用于進(jìn)行PCR擴增。Yeast Colony PCR Mix (Red, 2×)是含有紫紅色和黃色染料(電泳位置分別約2.5kb和10bp)的2倍濃度的PCR預混液，含有2× Taq DNA Polymerase、2× PCR Buffer、2× dNTP和2× Loading Buffer等，用戶(hù)只需加入酵母菌落裂解液、引物和水即可進(jìn)行PCR擴增，并且擴增完畢后可以直接上樣電泳。同時(shí)提供了Yeast Lysis Buffer在PCR反應前對酵母進(jìn)行有效預處理，可以充分釋放酵母DNA，能確保有效進(jìn)行酵母菌落PCR，從而大大縮短酵母轉化后陽(yáng)性克隆鑒定的時(shí)間，提高實(shí)驗效率。

酵母細胞的細胞壁主要成分為多糖(85%-90%)和蛋白質(zhì)(10%-15%)，其中多糖是由甘露聚糖、β-葡聚糖和少量的幾丁質(zhì)等組成，處于細胞壁內層的β-葡聚糖與幾丁質(zhì)共價(jià)相連，起到細胞骨架的作用；而外層的甘露聚糖與中層蛋白質(zhì)中的絲氨酸或蘇氨酸以O-糖苷鍵相連接，形成的甘露糖蛋白覆蓋于細胞表面，給予酵母細胞一定的韌性。酵母細胞壁獨特的結構致使其DNA難以被簡(jiǎn)單的PCR加熱過(guò)程所釋放，導致很多將酵母直接作為模板進(jìn)行PCR檢測的試劑盒成功率都比較低。

本試劑盒使用非常便捷。本試劑盒中提供的Yeast Colony PCR Mix (Red, 2×)已經(jīng)含有所有的通用組分，用戶(hù)只需自備引物和水即可對酵母菌落進(jìn)行PCR擴增。它大大簡(jiǎn)化了PCR操作，使操作更加快捷，也減少了PCR操作過(guò)程中可能導致的污染；同時(shí)Yeast Colony PCR Mix (Red, 2×)中已經(jīng)包含了上樣緩沖液組分，PCR擴增結束后即可直接上樣電泳，無(wú)需添加上樣緩沖液。

本試劑盒中提供了雙色染料，便于電泳時(shí)觀(guān)察電泳進(jìn)程。本試劑盒中的Yeast Colony PCR Mix (Red, 2×)加入了紫紅色和黃色的電泳示蹤染料(整體呈現紅色)，其在濃度為1%瓊脂糖膠中的遷移位置分別大約位于2.5kb和10bp處。PCR結束后可直接進(jìn)行電泳檢測，無(wú)需再添加上樣緩沖液。紫紅色和黃色示蹤染料不會(huì )影響對相應DNA 條帶的觀(guān)察和檢測。